איכות מבצעים רכישה בטוחה SSL שביעות רצון לקוחות שירות לקוחות
רכוש עבודה פרסם עבודה

אפיון In-vitro של הנוגדן המונוקלונלי LST-007 כנגד חיידקי Pseudomonas aeruginosa

דף הבית >> מקצועות >> מדעים >> מדעים >> אפיון In-vitro של הנוגדן המונוקלונלי LST-007 כנגד חיידקי Pseudomonas aeruginosa

מספר העבודה160520132839
שם העבודהאפיון In-vitro של הנוגדן המונוקלונלי LST-007 כנגד חיידקי Pseudomonas aeruginosa
שנת פרסום2012
מוסד לימודיםהמכללה האקדמית להנדסה-סמי שמעון
קורסעבודה מדעית בהנדסת ביוטכנולוגיה
מספר עמודים40
מספר מילים8,000
מספר מקורות57
מחיר240 ש"ח
מילות מפתחMulti Drug Resistant, Flagellin , Pseudomonas aeruginosa, Monoclonal Antibody
תיאור העבודה
העבודה בוצעה כחלק מחובותיי האקדמיות בסמסטר האחרון לתואר. העבודה בוצעה לאחר מחקר מעמיק של כחצי שנה ומעקב אחר הנוגדן המונוקלונלי כנגד החיידק השכיח ביותר ביחידות טיפול הנמרץ בבתי החולים.
מבצע הנחה
הזמן עכשיו
תקציר העבודה
בשנים האחרונות הולכת וגוברת שכיחות החיידקים העמידים לאנטיביוטיקה (MDR -Multi Drug Resistant). מחקר שנערך בבתי חולים בארה"ב ובאירופה גילה כי כל שנה נדבקים כ-800,000 חולים בחיידק ה- Pseudomonas Aeruginosa (להלן "PA") וכי 50% מכלל החולים נדבקים בזיהומים דווקא בכותלי בית החולים עצמו.
חיידק ה-PA הינו חיידק גרם שלילי, הנפוץ מבין זני הפסודומונאסים הפתוגניים, והינו אחד מהחיידקים המחוללים מחלות זיהומיות בתוך בתי החולים, ביניהם דלקת ריאות וזיהומים שונים בדרכי השתן.
ה-Pseudomonas תוקף בעיקר חולים שעברו טיפולים חודרניים כגון: הכנסת קטטר, הכנסת צינור לקנה הנשימה או חיבור נוזלים לצינורות הדם. לעיתים החיידקים עלולים לחדור לזרם הדם ולגרום להרעלה (אלח דם) ובמקרים בהם הם מגיעים לריאות, הם עלולים לגרום לדלקת ריאות קטלנית.
חברת "LOSTAM" אשר נוסדה ב-2009 החלה לפתח מספר נוגדנים (ממקור עכברי, כימריים והומאניים), בעלי אפניות שונה לזנים השונים של חיידק ה- Pseudomonas. מטרת המחקר הייתה לאפיין את הנוגדן ההומאני LST-007 במגוון שיטות מעבדתיות ולבחון את מידת יכולת ההיקשרות ופעולת הנוגדן על חיידקי Pseudomonas בעלי שוטון מסוג B ((Flagellin type B. ראשית, נבחנה מידת הקשירה של הנוגדן LST-007 בשיטת ה- ELISA לחלבון Flagellin type B. לאחר מכן נבדקה ספציפיות הנוגדן לחיידק באמצעות מספר שיטות אבחון:SDS PAGE לשם הערכת גודלן של השרשראות המרכיבות את הנוגדן, בדיקת תנועה של החיידק לשם ראיה ויזואלית לתנועת החיידק והשפעתו על ידי הנוגדן הנחקר ובדיקת חדירה לשם בדיקת מספר התאים שחדרו לתא המאכסן. תוצאות המחקר מראות כי הנוגדן הנבחן,LST-007 , הינו ספציפי באופן מוחלט לחיידק PA Flagellin type B והוא מסוגל לזהות את החיידק בריכוז נמוך של 8pg, דבר המעיד על אפיניות גבוהה מאוד של הנוגדן. בנוסף, נמצא כי הנוגדן הנבדק לעיל מסוגל גם לעכב את תנועתיות החיידק. ואכן, כבר בתוצאות ראשוניות נראה כי הנוגדן מונע חדירת חיידקים לתאים.
המשך פיתוח הנוגדן עתיד לתת מענה לטיפול בחולים שנדבקו ב- PA ולהוות פריצת דרך לטיפול במחלות זיהומיות בעזרת נוגדנים.
תוכן עניינים
תוכן עניינים
1. מבוא 1
1.1 עמידות בקטריאלית 1
1.2 הנוגדן 3
1.3 נוגדנים מונוקלונליים (חד שבטיים) כגישה טיפולית 5
1.4 Pseudomonas aeruginosa (PA) 6
1.5 השוטון- Flagellum 7
1.6 חברת "Lostam Biopharmaceuticals" 8
2. שיטות וחומרים 9
2.1 חומרים ותמיסות 9
2.1.1 חיידקים ותרביות תאים 9
2.1.2 חומרים ביולוגים 9
2.1.3 מצעי גידול 9
2.1.4 בופרים 9
2.1.5 חומרים נוספים 10
2.1.6 תמיסות 10
2.2 שיטות 11
2.2.1 ייצור, ביטוי וניקוי הנוגדן LST-007 11
2.2.2 ייצור וניקוי חלבון השוטון Flagellin Type B 11
2.2.3 אלקטרו-פורזה בג'ל בשיטת SDS-PAGE בתנאים מחזרים 11
2.2.4 מבחן ELISA בציפוי האנטיגןflagellin 11
2.2.5 מבחן Fixed ELISA 12
2.2.6 זריעה וספירה 13
2.2.7 מבחן תנועתיות החיידק PA (motility assay) 13
2.2.8 מבחן חדירת החיידק Invasion assay 14
3. תוצאות 15
4. דיון ומסקנות 23
4.1 אפיניות וספציפיות הנוגדן 23
4.2 יכולת הנוגדן LST-007 להיקשר לחיידק השלם 24
4.3 תנועתיות החיידק PA 24
4.4 חדירות החיידק לתאים Invasion assay 24
5. ביבליוגרפיה 26



טבלאות
טבלה מס' 1- חיידקים העמידים לטווח רחב של תכשירים אנטיביוטיים.............................................1
טבלה מס' 2- רשימת תמיסות...................................................................................................10


איורים
איור מס' 1- ייצוג סכימטי של מולקולת נוגדן.................................................................................4
איור מס' 2- תאור ה-Flagella של חיידקים גרם שליליים...............................................................7
איור מס' 3- פרופיל הנוגדן LST-007 כפי שמוצג ע"י צביעה של ג'ל ב-Coomasie blue......................15

גרפים
גרף מס' 1- קישור הנוגדן LST-007 לחלבון ה- FLA-B בשיטת ELISA........................................16
גרף מס' 2- קישור הנוגדנים LST-007 ו-LST-001 לחלבון ה- FLA-A ב- ELISA..........................17
גרף מס' 3- קישור הנוגדן LST-007 לחלבון flagellin type b בשני ריכוזים שונים......................18
גרף מס' 4- קישור הנוגדן LST-007 לחיידק Pa01(FLA-B) ו-PA9721 (נטול השוטון..................19
גרף מס' 5- מבחן תנועתיות החיידק PA בריכוזים עולים עד 20µg/ml לאחר 18 שעות אינקובציה.....20
גרף מס' 6- השוואת תנועת החיידק בין 24 שעות (קו כחול) לבין 48 שעות (קו אדום) בריכוזים שונים (mm)....................................................................................................................................21
גרף מס 7- חדירת החיידקים לתוך תאי A-549 מפוצצים, לאחר טיפול ב-LST-007 40µg/ml, בהשוואה לתאים שלא עברו טיפול..........................................................................................................21


עוד עבודות בנושא מדעים
בעיות קיצון מתמטיקה- עבודה בציון 100
קשיים בהוראת המתמטיקה סקירה ספרותית של הנושא
הפרלקסה
הפקת שמן מזיתים
עבודת מחקר במסגרת קורס פרוייקטים ברפואה
עוד עבודות במדעים
שתף |